首先取出鍋內層的滅菌桶，外層鍋中加水到四分之三的位置，加水后放回內層的滅菌桶。需要滅菌的器皿或其他物品放入滅菌鍋里。物品分類放置后，關閉鍋蓋，檢查排氣閥、安全閥狀態。設置好滅菌鍋的使用參數后按下工作鍵，等待到時后關電放氣即可。
滅菌鍋內物品不能過擠，不能超過鍋內容量。盡量將同類物品裝在同一鍋內滅菌。若有不同類物品裝放在一起，應以難達到滅菌物品的所需溫度和時間為準。物品裝放時，上下左右均應交叉錯開，留出縫隙，使蒸汽容易穿透。大滅菌包應立著放上層，小包放下層。
布類和金屬類物品同時滅菌時，應將金屬類物品包放在下層，使兩者受熱基本一致，并防止金屬物品滅菌中產生的冷凝水弄濕包布。加蓋，同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致。打開電源，檢查參數設置是否正確，按下工作鍵，達到規定的滅菌時間后，關閉電源，打開放氣閥緩慢放氣；放氣閥無蒸汽排除時，方可開啟鍋蓋。
注意事項：汽未放盡前，不得開啟高壓鍋。如果滅菌后的培養基在鍋內不及時拿出，需在蒸汽放盡后將鍋蓋打開，切忌將培養基封閉在鍋內過夜。壓力表指針在0.05MPa以上時，不能過快放汽，以防止壓力急速下降，液體滾沸，從培養容器中溢出。
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